116问答网 > 1.将之前已经构建好载体的DH5α活化提取质粒2.转化至BL21后筛选 ,请问这两步详情步骤是？

1.将之前已经构建好载体的DH5α活化提取质粒2.转化至BL21后筛选 ,请问这两步详情步骤是？

2024-11-17 23:45:37

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回答1：

活化就是将冻存的菌液，在对应抗性(视具体质粒而定)的平板上划线，待菌落长起来后挑取单菌落，摇起来后再提质粒。
转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟，然后将5 ul质粒加入感受态细胞，放在冰上20分钟。再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟，然后迅速放回冰中静置3-5分钟。之后将感受态细胞加入500 ul SOC培养基中，放入37℃摇床1 h。之后用接种环在含有质粒对应抗性的平板上划线。长出来的单菌落就是含有重组质粒的感受态细胞，如果不放心可以去测个序。