（1）装瓶（袋）所用菌种瓶（750毫升专用菌种瓶）要提前刷洗干净，空干后备用。木屑或棉籽壳培养料装瓶，装料至瓶颈可用木棒压实、压平，料面须在瓶肩以下。然后要在料中间扎直径为1.5～2厘米的孔，将瓶口内外壁擦净。取一块完整、略大于掌心的棉絮卷成棉塞，棉塞要比瓶口略粗，稍用力即可旋入瓶口为宜。塞入瓶口2/3、外露1/3，棉塞头部与瓶颈的底口平，要松紧适度。过紧影响通气，发菌慢；过松不但棉塞易脱落，且起不到过滤杂菌的目的，引起杂菌感染。塞好棉塞后，盖上牛皮纸或双层报纸，用皮筋扎紧。
（2）灭菌:采用高压灭菌或常压灭菌。高压灭菌锅内装满被灭菌的料袋或菌种瓶后，盖上盖扣紧螺旋，即可加热升温，待压力表指针到“0.5”刻度时打开放气阀，指针降回“0”刻度时，继续升温达到1.47×105～1.96×105帕时，开始计算灭菌时间，在确保标准压力下维持2～2.5小时。常压灭菌需达到100℃后维持8～10小时。
（3）接种:接种前必须使瓶温降至30℃以下，防止高温接种烫伤菌种。有冷却室的在冷却室冷却，没有冷却室的可直接在接种室冷却。每支母种可转接3～4瓶原种。接种前，首先把接种室（箱）打扫干净，喷2%来苏儿或新洁尔灭净化空气，再把已灭菌的菌种瓶及用具全部搬进去，然后按常规对接种室（箱）进行严格消毒，接种需严格按照无菌操作进行。
具体操作方法：接种者手持母种试管，用酒精棉球将试管外壁擦2次，然后拔开棉塞，试管口对准酒精灯火焰上方，用火焰灼烧一下管口，把烧过的接种耙迅速插入种管内贴管壁冷却，将斜面前端0.5厘米长的菌丝块挖去，剩余的斜面分成3～4段，另一个人在酒精灯火焰上方，在接种者取好菌种块的同时拔开原种瓶棉塞，接种者将菌种块取出，快速接入原种瓶的接种穴内，棉塞过火焰后塞好。如此一支母种试管可接3～4瓶原种。每接完一支试管，接种耙要重新消毒，防止交叉感染。接完种后，立即将台面收拾干净，将各种残物如试管、洒落的培养基、消毒用过的棉花等均清出室外，按上述方法进行第二轮接种。
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