佳能单反相机EOS 5D Mark III的常用感光度是ISO 100-25600，扩展时最高ISO 102400。比EOS 5D Mark II的常用感光度上限ISO 6400提高了两个等级，扩大了高感光度范围。
5D Mark III的低感光度范围也很广，利用低感光度即使是在明亮的室外使用大光圈定焦镜头也能以接近最大光圈的设置轻松拍摄。并具有扩展ISO感光度设置功能，可以选择L（相当于ISO 50）、H1（相当于ISO 51200）、H2（相当于102400）的ISO感光度。
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