请问cre⼀loxp转基因小鼠为什么要通过杂交获得?能不能直接将cre和loxp导入同一个ES细胞里?

2025-03-30 08:53:09
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回答1:

现在的基因插入小鼠基本还是用的同源重组的方式,对基因组对定点插入修饰,但是同源重组有一个问题就是,它发生的自然概率非常低,因此你别说同时转两个质粒进去,就是拿到一个成功打靶的细胞也非常不容易,因此需要进行大量的筛选工作,同时引入两个位点修饰,一是卵母细胞很难转染,加上你转进去了期待其发生同源重组的概率又比较低,因此基本不具有现实可行性。而你如果分别有两种老鼠,其实配很快的。
另外将这两个东西分开更大好处在于利于自由组合研究,比如,cre有X种不同脏器的,而loxp你可以做Y种不同基因的,这样你就可以自由组合做X乘以Y种老鼠,也就是可以任意在不同组织敲不同基因,方便又自由,可以极大拓展你可以研究的领域
再者,另外一种比较奇葩的情况就是,假设你的敲除老鼠致死,尤其是胚胎致死,那么结果会是,你翻来覆去往里倒基因,结果始终拿不到敲除老鼠,然后你就怀疑了,到底是你运气背或者操作不好,始终不能实现打靶,还是本来这个基因敲除就会致死,把cre和loxp分开就很好的解决了这个问题,因为理论上这两个东西单独一个绝对不可能致死,若是胚胎致死那么你可以解剖孕鼠做基因型鉴定来确定。