1 目的基因是你自己研究的那个基因,是你人为添加到质粒上的基因.
标记基因是质粒上原本就存在的基因,一般是抗性基因.
在克隆的时候,你怎么判定哪些质粒是转化成功进入细胞了的呢?也就是“组DNA的鉴定和选择”的过程.而标记基因就是标记出连接转化成功了的克隆.如果标记基因,比如抗性基因表达了,那么就会在抗性培养基上长出菌落来.这样也从侧面说明了,你的目的基因很可能也克隆成功了.
2 首先你要弄清楚质粒的定义,它同样是一中可以独立存在在细胞中独立复制的环状DNA,独立于细胞基因组DNA.一般基因工程中,构建成功的质粒导入到细胞中,不需要整合到体细胞基因组中,就可以完成复制或者表达目的基因的功能.
但是,也有特殊情况下,需要通过同源重组将目的基因整合到细胞基因组DNA中的,这种视实验需要而定.
3 整合,一般是通过同源重组的途径,将你的目的基因插入或者替换到体细胞基因组DNA中.这样就可以随着细胞的分裂完成复制,或者随着细胞某些基因的表达调控使得目的基因得到表达和调控.相当于就是使得你原本外来的目的基因称为体细胞的整体的一部分了.
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