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①瓶内生根苗移砂
经过20余天诱导生根的组培苗,已经形成完整的植株,这时需进行移栽前炼苗,一般3天左右,最长时间不能超过5天,时间过长,会造成培养基发霉,根腐烂等。将打开瓶口炼好的苗用清水冲洗掉培养基,栽入已消毒好的砂中,砂子的pH值为5.8。砂中培养温度为18—27℃,光照为4000Lx,上面罩有塑料薄膜,湿度控制在80%—90%,经过10—12天砂内培养,植株成活并能正常生长,砂中成活率达96.4%。
②砂苗移入容器土
生根苗移砂后,叶片迅速展开,原来无根毛的根系在砂中已形成多条根毛的根系群。将砂中生长健壮的苗转入室内容器土内,土壤选用细山皮土,培养温度高达30℃,光照增强,夜间用塑料薄膜覆盖,既保温又保湿。共移入室内容器土5291株苗,成活率达86.3%。
③移栽
室内容器土苗约30天左右,经过锻炼后于6月份移入田间,及时进行浇水、除草、防病、防虫等田间管理,保证幼苗苗壮成长,田间成活率达85%。
1、培养基配方
诱导萌芽培养基:MS+BA 0.3mg/L+NAA 0.1mg/L
增殖培养基:MS+BA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/l
生根培养基:1/2MS+NAA 0.1mg/L
2、培养程序
取材菊花能够产生再生植株的器官很多,以组培快繁为目标最好选茎尖、茎段、花蕾为外植体培养增殖效果最好。选取用扦插苗培育的无病虫害、健壮的植株,在其上取材,可保持其优良品种特性。在取材前2~3周,将入选株置于温室内培养,不要对叶面喷水,这样能够提高灭菌的成功率。接种前切取带腋芽的茎段或未开的花蕾,这时花瓣外有一层薄膜包着,里面是无菌的。灭菌处理时茎尖的嫩叶不要剥得太干净,以免伤口面暴露太大,使茎尖受到过大的损害。灭菌茎段除去叶片,只留一小段叶柄。材料初步切割后,用洗衣粉水漂洗三次,用自来水冲净后,将其放入含有三滴吐温的0.1%升汞溶液中消毒12min,并不时摇动,然后用镊子将其夹入含三滴吐温的8%次氯酸钠溶液中浸泡8min(超净工作台上)并不时摇动。于无菌水中漂洗二次后待用。切割将茎切去1小段,这样可减少灭菌药物的毒害。切除茎尖上的幼叶;若是蕾须剥去花被,露出里面半球形的花序轴,再视其大小纵切4~6块,接种到诱导培养基中。生长及分化外植体经培养后,一般20~40D茎尖处可分生出新芽,茎断的叶腋处也会萌发出丛生芽,基部生长的愈伤组织也会分化出新芽。而花蕾外植体经过 15~20D的培养,会形成愈伤组织;再经过20~30D的培养,愈伤组织就会分化出较多的丛生芽。将从以上外植体诱导分化出的丛生芽,分切成数块放入增殖培养基中继代培养。开始分化率和分化苗的数量都较小,随继代次数增加,分生苗很快就能够增多起来。增殖的方式除诱导丛生芽增殖外,还可用茎切段作微型扦插来繁殖,它的增殖速度也完全能满足快速繁殖的要求。方法是用各种再生途径产生的嫩茎为材料,培养其长到一定高度时,把它切成节段,一般是一叶为一段,然后将切断的基部插入增殖培养基中培养。28D天后,腋芽即可长成新的小植株,重复上述的方法不断进行继代培养,从而达到快繁殖目的。生根培养在继代培养基中培养25~30D进行转瓶时,将那些生长正常,苗高达到2~3CM的单株嫩茎切下,插到生根培养基中,7D后可形成有突起的淡绿色根原基,经过2周培养后,即可生根。菊花的生根非常容易,在多种生长素浓度下,乃至不加任何生长素的培养基上,都可以获得100%的生根效果。质量标准及调控技术
菊花出瓶苗的标准时叶色浓绿,粗壮,苗高2~3CM,有根且根系发达。经过渡培养的下地苗,则要求小苗叶色正常,浓绿,植株矮壮。
菊花是一种比较容易进行组织培养的植物,适用于菊花的培养基种类很多,它对激素的要求不很严格,适应范围较广,菊花在组织培养中是一种较不容易因为激素浓度的高低而引起变异或玻璃化的一个种类。但是BA含量不应超过10mg/L,NAA不应超过2mg/L。菊花继代苗的植株应达到叶形、株形正常,增殖培养率可达到5~10倍以上。
菊花在培养瓶中培养的温度适应范围较宽,在22~28℃都可以。但温度过低,会使苗质脆弱,生长速度延缓;温度过高培养基水分蒸发较快,致使植株还未分化到所需程度,就开始出现干萎。所以温度最好在24~26℃之间。培养室光照每天12h,光照在1000~4000lx都可以生长,但是光照过弱会使幼苗出现徒长现象,茎软叶细弱,低质量的组培苗,出瓶后的过渡成活率也低。因此光照以2500~3000lx为宜。用来生根的单株嫩茎必须有1~2CM 高,在生根培养基上生长15D后,苗高才能达到2~3 CM,有2~3条根长达1~2CM的不定根。最好生根率达100%后,才可出瓶炼苗。如若还有少部分植株未长出足够的根系时,可将瓶苗在上述环境培养条件下延缓几日,待其长出根系时再出瓶。
出瓶苗的过渡管理
菊花的有根苗移栽成活容易,将有根的植株从瓶中用镊子轻轻夹出,洗净根部黏附的琼脂,栽入珍珠岩基质中。移栽前期将空气湿度保持在75%~85%之间,遮光率为40%,环境温度控制在20~26℃,就可使试管苗在20D左右移栽成活,并长出新根新叶。经1~2个月的管理,便可定植于富含腐殖质,经过灭菌处理的砂质壤土中。菊花喜欢微潮偏干的土壤环境,在定植时不必施用基肥,随着小苗对外界环境的适应,可每隔1~2周追稀液体肥料一次。由于菊花有忌高温、喜凉爽的习性,菊花试管苗定植后,不可接受过强的日光照射,应该采用先遮荫再逐渐增加光照的管理方法。由于菊花的过渡成活率比较高,所以有时也可以从瓶内出来就直接下地栽培,但管理呀非常细心。
组培菊花移栽方法:
大规模的室外移栽需要在苗床上进行,包括整地、移栽、管理等环节。
1、整地做床
圃地要求土质疏松,排水良好;土壤要经深翻细耙。施基肥15000kg/hm2,并撒硫磺15kg/hm2和呋喃丹715kg/hm2防治病虫害。将整好的地作成高畦,畦宽1.180m,畦高0.125m,沟0.15m。
2、移栽和管理
将幼苗根部的培养基洗净,栽种到苗床上。苗周围要轻轻压实,并浇透水1次。开始几天要搭荫棚并及时喷水或喷雾,避免强光照并保证高的湿度。1~2d后可逐步适当增加光照,每天浇水1~2次,夏天高温浇水2~3次。并及时松土除草和施肥,保障幼苗健康生长。
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